Thérapie de cellules souches de la neurodégénérescence dans l'ataxie de type oculomoteur d'apraxie 2 et ataxie cérébelleuse

 

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Ataxie Type apraxie oculomotrice 2 (AOA2) est une ataxie cérébelleuse autosomique récessive rare. Des données récentes suggèrent que la protéine défectueuse de ce syndrome, Senataxin (SETX), fonctions dans le traitement de l'ARN pour protéger l'intégrité du génome.

À ce jour, seules les cellules lymphoblastiques dérivées de patients, les fibroblastes et les cellules knockdown de setX étaient disponibles pour enquêter sur AOA2. la perturbation récente du gène setX n'a ​​pas conduit à des défauts neurocomportementaux ou neurodégénérescence, ce qui rend difficile d'étudier l'étiologie de AOA2.

 

traitement de l'Ataxie avec des cellules souches

Les cellules souches Thery sont combinés avec spécialisés thérapie pour l'ataxie, qui met l'accent non seulement à aider le patient à faire face à leurs symptômes, mais traite aussi la cause directe des symptômes, contribuer à la guérison des lésions cérébrales traumatiques. Nous croyons que l'approche globale de la thérapie des cellules souches ataxie donne aux patients une forte probabilité d'amélioration, leur permettant d'améliorer leur qualité de vie.

Stem programme de traitement cellulaire peut être appliquée à différents types d'ataxie, y compris SCA1, SCA2, SCA3, SCA6, AOA1, AOA2, ataxie Frederick, qui est causée par un traumatisme crânien, et beaucoup plus.

Quelles sont les améliorations possibles dans le traitement des cellules souches?

Le but du traitement est de guérir les lésions cérébrales causées par la maladie, pour rétablir la fonction neurologique.

Il existe différents types d'amélioration après notre traitement et nos anciens patients ont les éléments suivants *:

Améliorer l'équilibre et la coordination
réduisant la fatigue
Discours améliorée
tremblements diminué
Amélioration de la fonction de l'appareil de moteur
Amélioration de avalement
Diminution de la douleur neuropathique
Amélioration de la vigilance mentale

atrophie Agité du cerveau avec l'IRM.

Dans les années récentes, la thérapie de cellules souches est devenu le traitement de ces maladies un point d'accès. Les cellules souches mésenchymateuses obtenues facilement par amplification in vitro peuvent être beaucoup à long terme in vitro. Le processus de culture pour maintenir son pluripotence dans certaines conditions peuvent être en mesure de faire la différence dans les cellules nerveuses et peut sécréter une variété de facteurs neurotrophiques, pour favoriser la réparation des nerfs des cellules. En thérapie de cellules souches, pour surmonter l'acquisition de cellules souches neurales à partir de tissus cérébraux adultes de danger et les limites, mais aussi à éviter la transplantation du cerveau du fœtus en présence de l'éthique, rejet immunitaire, sources limitées de problèmes, il n'y a pas de toxicité aiguë ou chronique et tumorigène dans le corps peut contribuer à la réparation des nerfs endommagés.

Avec l'aide de la technologie des cellules souches et rarement utilisés dans un hôpital clinique.

sang ou les tissus gras parmi les premières cellules autologues souches mésenchymateuses pour traiter les blessures de la moelle épinière et d'autres lésions neurologiques et ont obtenu des résultats positifs. Maintenant, les chercheurs utilisent un cordon ombilical de cordon alternatif, non seulement pour obtenir un nombre suffisant de cellules souches mésenchymateuses peut également être congelé, restauration de la pré-demande, un peu de temps pour assembler un nombre suffisant de cellules souches utilisées dans le traitement clinique, même si le patient a retiré l'extraction de la douleur du cerveau, mais raccourcit également le temps d'attente pour la culture cellulaire.

Et dans la pratique clinique, il a prouvé sa fiabilité et la sécurité, et non une réponse immunitaire. L'application clinique peut être obtenue à partir de cellules souches mésenchymateuses autologues pour traiter le même effet.

cas avec ataxie cérébelleuse les symptômes chez les patients atteints de maladies neurodégénératives de cellules souches mésenchymateuses entre la thérapie par injection sous-arachnoïdienne ombilical après le traitement des patients atteints de mouvement, équilibre, la langue, l'écriture, comme la possibilité d'avoir différents niveaux de récupération, l'amélioration de la qualité de vie, diminué de manière significative après une grande échelle Ataxie et les scores de traitement ADL (P <0.05), et aucun effet indésirable.

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En savoir plus sur la thérapie de cellules souches de l'Ataxie et la recherche scientifique

Ataxie Type apraxie oculomotrice 2 (AOA2) a d'abord été décrit 15 il y a quelques années et par la suite sur le chromosome 9.

Développer un modèle neuronal plus pertinent pour étudier la neurodégénérescence dans AOA2, chercheurs dérivés progéniteurs neuronaux chez un patient avec AOA2 et un contrôle par les cellules souches pluripotentes induites (IPSC) reprogrammation des cellules. AOA2 COPS et progéniteurs neuronaux présentent des niveaux accrus de dommages oxydatifs, Cassures double brin, augmentation de la mort cellulaire induite par des dommages de l'ADN et de l'accumulation de boucle R. l'expression de l'ensemble du génome et le gène pondéré analyse de réseau co-expression dans ces progéniteurs neuronaux identifiés à la fois signalés précédemment et de nouveaux gènes affectés et les voies cellulaires associés à un dysfonctionnement Senataxin et la physiopathologie de AOA2, fournir un éclairage supplémentaire sur le rôle de Senataxin dans la régulation de l'expression génique à l'échelle du génome entier. Ces données montrent que CSPi peuvent être générés à partir des patients avec l'ataxie autosomique récessive, AOA2, différenciées en neurones, et que les deux types de cellules récapitulent le phénotype cellulaire AOA2. Cela représente un système modèle nouveau et approprié pour enquêter sur la neurodégénérescence dans ce syndrome.

Les cellules souches avec origine mésenchymateuses sont des cellules apparaissent d'abord dans les premiers stades de la vie intra-utérine cellules qui se différencient dans toutes les autres cellules. Ils sont également responsables de la production de cellules sanguines à ce stade précoce. Les cellules des différents systèmes fonctionnels formés au cours de la phase du fœtus étaient des cellules souches avant leur transformation. Les cellules comme les cellules chondrogéniques, cellules neurogène, et les cellules ostéogéniques viennent à l'esprit.

 

Ce trouble se caractérise par une atrophie progressive cérébelleuse, neuropathie périphérique, oculomoteur apraxie à ~50% des patients et les niveaux élevés d'a-foetoprotéine avec un âge de début entre 10 et 20 années .

Le gène défectueux dans AOA2 a été identifié comme codant pour SETX Senataxin, une 2667 protéine d'acides aminés qui contient une très conservé C-terminal à sept domaines motif de la superfamille 1 des hélicases à ADN / ARN et un domaine N-terminal importants pour les interactions protéine-protéine .

L'utilisation de cellules lymphoblastiques et les fibroblastes de patients AOA2 et les cellules SETX-ARNi appauvri comme systèmes modèles, rôles pour Senataxin ont été découverts qui englobent (je) protection contre les dommages à l'ADN , (ii) régulation de la transcription, y compris la terminaison de transcription, l'efficacité de l'épissage des ARNm spécifiques et la sélection alternée des sites d'épissage et de la résolution en boucle et R (iii) localisation à l'interface de la transcription et la réplication .

R boucles sont des hybrides ARN / ADN qui se forment sur les sites de pause de la transcription par l'interaction avec une matrice d'ADN simple brin derrière un complexe ARN Pol II allongeant, qui sont potentiellement dangereux et peuvent provoquer une instabilité génomique si ne sont pas résolus. est en outre étayée Un rôle pour Senataxin de l'allongement de la transcription et de terminaison par un rapport, montrant que les cellules knock-down avec affichage Senataxin une augmentation de la densité translecture de l'ARN et l'ARN Pol II en aval du Poly(UNE) emplacement et également présenter des niveaux accrus de formation de boucle de R . Senataxin a été trouvé pour localiser des foyers à nucléaires distincts dans les cellules en phase S / G2, et le nombre de ces foyers a augmenté en réponse à la réplication avec facultés affaiblies, ce qui suggère que Senataxin localise aux sites de collision entre l'appareil de transcription et des composants du replisome .

en outre, une interaction dépendante SUMO entre Senataxin et Rrp45, un composant de base de la exosomes, a été également montré pour co-localiser des foyers nucléaires correspondant à des sites de boucles R, ce qui suggère que la transcription se connecte Senataxin, des dommages de l'ADN et de l'ARN surveillance .

Génération et caractérisation des cellules souches iPSC AOA2
Afin d'optimiser les conditions et pour réduire le risque d'instabilité chromosomique, utilisé passage précoce (P < 5) fibroblastes pour la reprogrammation. Après la transfection avec des plasmides épisomiques pEP4EO2SCK2MEN2L et pEP4EO2SET2K, pas à pas adapté pour les cellules KO remplacement de sérum (Koshri) moyenne au cours des 4-5 premiers jours de génération COPSi, en remplacement direct avec le milieu KOSR a été trouvé conduire à la mort étendue des fibroblastes AOA2.

Après 2 semaines, transduites patient AOA2 et des fibroblastes témoins appariés ont donné naissance à des colonies de petites cellules rondes avec un rapport élevé à cytoplasme-noyau typique des cellules souches humaines pluripotentes

Bien que les données montrent qu'il était possible de reprogrammer des fibroblastes AOA2, l'efficacité a été quelque peu réduite par rapport à celle des témoins. Treize colonies du patient homozygote AOA2 qui a exprimé la tige TRA-1-60 marqueur de surface cellulaire

ont été élargies pour une analyse ultérieure. Deux de ces clones AOA2, AOA2(C7) et AOA2(C8), ont été sélectionnés pour une analyse plus approfondie étant donné que ces clones affichent une expression robuste des marqueurs pluripotence TRA-1-60, TRA-1-81, Nanog et Oct4

Les clones de contrôle ont été examinés de façon similaire comme décrit précédemment et conformes aux mêmes critères. La présence de la c.6109 A>G mutation faux-sens homozygote dans AOA2 COPS a été confirmée au niveau d'ARNm par séquençage , et un caryotype normal a été observée pour AOA2(C7) et AOA2(C8) clones iPS

OCT4, NANOG et d'expression SOX2 dans le AOA2 CSPi n'a pas été dérivés de plasmides intégrés ou persistants reprogrammations comme (je) réaction en chaîne de la polymérase (PCR) l'analyse de l'ADN génomique a révélé aucun amplicons suivant 36 cycles de PCR en utilisant des amorces ancrées IRES conçues pour amplifier la reprogrammation des gènes OCT4, SOX2, LIN28, KLF4 et c-MYC (plasmides utilisés comme témoins positifs) et (ii) transcriptase inverse (RT)analyse -PCR de l'ARN isolé à partir du AOA2 et de contrôle COPSi a montré une absence d'expression du transgène (des fibroblastes humains transfectés de manière transitoire avec les plasmides de reprogrammation utilisés comme témoin positif)

 

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