Última atualização: Agosto 17, 2026
Tratamento com células-tronco para pacientes com doença autoimune por infusão sistêmica de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo autólogo expandido por cultura
Expectativa de vida prolongada, O estilo de vida e as mudanças ambientais causaram uma mudança no padrão de doenças nos países desenvolvidos em direção a um aumento de doenças degenerativas e autoimunes. As células-tronco tornaram-se uma ferramenta promissora para o seu tratamento, promovendo a reparação dos tecidos e a proteção contra danos associados ao ataque imunológico. Células-tronco autólogas derivadas de pacientes apresentam uma opção segura para este tratamento, uma vez que não induzem rejeição imunológica e, portanto, múltiplos tratamentos são possíveis sem qualquer risco de sensibilização alogênica, que pode surgir de transplantes alogênicos de células-tronco. Aqui relatamos o resultado dos tratamentos com cultura expandida derivada de tecido adiposo humano células-tronco mesenquimais (hAdMSCs) de 10 pacientes com danos teciduais associados a doenças autoimunes e opções terapêuticas esgotadas, incluindo perda auditiva autoimune, esclerose múltipla, polimiotite, dermatite atópica e artrite reumatóide. Para tratamento, desenvolvemos um protocolo padronizado de expansão de cultura para hAdMSCs a partir de quantidades mínimas de tecido adiposo, fornecendo número suficiente de células para injeções repetitivas. Altas eficiências de expansão foram rotineiramente alcançadas em pacientes autoimunes e em doadores idosos, sem perda mensurável no perfil de segurança, estabilidade genética, vitalidade e potência de diferenciação, características de migração e homing. Embora as conclusões que podem ser tiradas dos tratamentos de uso compassivo em termos de eficácia terapêutica sejam apenas preliminares, os dados fornecem evidências convincentes de segurança e propriedades terapêuticas de AdMSC administradas sistemicamente em pacientes humanos sem outras opções de tratamento. Os autores acreditam que AdMSCs autólogas expandidas ex vivo fornecem uma alternativa promissora para o tratamento de doenças autoimunes. São necessários mais estudos clínicos que levem em conta os resultados obtidos em estudos de caso como os aqui apresentados.
Introdução
No século 21, a esperança de vida progrediu rapidamente, tal como o número de doenças anteriormente pouco comuns sem tratamento. Sugere-se que terapias baseadas em células-tronco sejam capazes de reparar e regenerar tecidos em doenças associadas à idade, mudou o estilo de vida e a exposição ambiental, como doenças autoimunes e acidente vascular cerebral. Em particular, células-tronco mesenquimais (MSC) foram aplicados para tratar essas doenças [1–3]. No entanto, a falta de protocolos de cultura otimizados para alcançar um número suficiente de células, questões de segurança relativas a células expandidas ex-vivo, a possível redução na potência das células-tronco derivadas de idosos e pacientes com doenças autoimunes colocou em questão as aplicações clínicas de células-tronco autólogas nesses pacientes.
Para aplicar MSC derivadas de tecido adiposo autólogo humano (hAdMSC) no ambiente clínico, desenvolvemos um protocolo padronizado para isolar e expandir a cultura de AdMSC a partir de quantidades mínimas de gordura in vitro, alcançar números de células suficientes para múltiplas invenções terapêuticas [4]. AdMSCs expandidos mantiveram a potência para diferenciação eficaz independentemente da idade do doador e do estado da doença [5]. A estabilidade genética confirmada e a segurança in vivo de hAdMSCs expandidas ex-vivo em modelos animais e pacientes [4] indicam que AdMSCs de pessoas idosas são aplicáveis para terapia autóloga e são comparáveis àquelas derivadas de doadores jovens [5]. Além disso, investigamos a capacidade de migração de hAdMSCs e seu retorno in vivo em modelo animal após infusão sistêmica.
As MSC incluem uma série de células-tronco com uma capacidade inerente de auto-renovação e potencial de diferenciação para linhagens mesodérmicas e outras linhagens embrionárias, incluindo adipócitos, osteócitos, condrócitos, hepatócitos, neurônios, células musculares e células epiteliais [6–8], dependendo do microambiente circundante. Um grande conjunto de evidências demonstrou que as MSC comumente têm propriedades imunomoduladoras e anti-inflamatórias [9–12]. Embora as propriedades de diferenciação das MSC pareçam depender de pistas microambientais in vivo, os efeitos imunomoduladores parecem ser bastante intrínsecos e, portanto, apresentam uma base atraente para a terapia de doenças autoimunes e inflamatórias por infusão sistêmica. Além disso, propriedades intrínsecas das MSC demonstraram secreção de vários fatores, modulação do ambiente local e ativação de células progenitoras endógenas [13, 14]. Por isso, A terapia com MSC evocou promessas terapêuticas para a doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH), lúpus eritematoso sistêmico (LES), artrite reumatoide (RA), esclerose múltipla (EM), diabetes, infarto do miocárdio, tireodite e diferentes tipos de distúrbios neurológicos, entre outros [15–23].
Várias vias de administração de MSCs, incluindo intravenoso (4.) [24], intra-arterial [25] ou intracerebral [26] foram relatados para aplicação de células-tronco. Dessas rotas, 4.. é uma estratégia conveniente para entregar células e efeitos terapêuticos ao local da lesão. MSC injetadas por via intravenosa podem ficar temporariamente presas nos pulmões, sequestrado no baço, e são predominantemente eliminados pelos rins [27]. O acúmulo inicial de MSC nos pulmões pode induzir a secreção de efetores antiinflamatórios secundários [28].A recente demonstração de propriedades de homing in vivo de MSCs e AdMSCs derivadas de medula óssea estimulou ainda mais a administração i.v.. aplicação de MSC para terapia [29]. Nesta revisão, descrevemos vários casos de aplicação autóloga de AdMSCs em condições autoimunes, incluindo perda auditiva autoimune, EM, polimiotite (PM), dermatite atópica (ANÚNCIO) e AR. Sugerimos que múltiplas infusões de AdMSC podem estabelecer a homeostase imunológica durante longos períodos de tempo.
Fenótipo e potenciais de diferenciação de MSCs
Critérios mínimos foram propostos para definir MSCs pelo Comitê de Células-Tronco Mesenquimais e Teciduais da Sociedade Internacional de Terapia Celular. Estes são: 1) capacidade de aderência plástica; 2) falta de marcadores hematopoiéticos, como CD45, CD34, CD14, CD11b, CD79α, CD 19, ou HLA-DR; 3) potência de diferenciação mesodérmica tripotencial em osteoblastos, condrócitos, e adipócitos; e 4) capacidade imunomoduladora [30]. Além de sua capacidade de diferenciação mesodérmica, Também foi demonstrado que as MSCs se diferenciam in vitro na linhagem ectodérmica, como neurônios, mas também na linhagem endodérmica, como miócitos e hepatócitos [7, 31]. As condições para diferenciação de MSCs enxertadas in vivo podem ser mais complexas e reguladas por fragmentos microambientais de tecidos locais. Por exemplo, MSCs enxertadas no coração podem se diferenciar em cardiomiócitos, células musculares lisas, e células endoteliais vasculares [32–34]. Além disso, através de uma série de sinais do tecido local, MSCs enxertadas podem ser induzidas a secretar diversas citocinas que possuem funções tróficas e imunomoduladoras e subsequentemente contribuem para o reparo e regeneração tecidual [11].
Fontes de MSCs
MSC foram isoladas pela primeira vez como unidades formadoras de colônias de fibroblastos (UFC-F) ou células estromais da medula óssea (BMMSC) por Friedenstein e colegas [35]. Seu nome mais comum é baseado na propriedade de se diferenciar em uma variedade de tecidos mesodérmicos, incluindo ossos., cartilagem e gordura. MSCs foram encontradas em vários órgãos e tecidos, incluindo gordura, periósteo, membrana sinovial, líquido sinovial, músculo, derme, dentes decíduos, pericitos, osso trabecular, almofada de gordura infrapatelar, cartilagem articular, cordão umbilical e sangue do cordão umbilical [36, 37], e placenta [38].
BMMSCs foram aplicados pela primeira vez para terapia [39, 40]. No entanto, aspirar MO do paciente é um procedimento invasivo que produz apenas um pequeno número de células (sobre 1-10 por 1 × 105 ou 0.0001-0.01% de todas as células nucleadas BM), exigindo altas taxas de expansão [41]. Além disso, o potencial terapêutico das BMMSCs pode diminuir com o aumento da idade do doador e está associado ao declínio da capacidade de diferenciação e à redução da vitalidade in vitro [42]. Em todo o caso, para transplante autólogo, BMMSCs e AdMSCs expandidos foram aplicados com segurança em numerosos estudos em humanos [4, 39, 40].
Células-tronco mesenquimais adiposas
O tecido adiposo é uma fonte atraente de MSCs para terapia com células-tronco autólogas, porque o tecido adiposo é facilmente obtido em quantidades suficientes usando um procedimento minimamente invasivo [23, 43]. Além disso, tecidos adiposos contêm mais MSCs do que BM (sobre 100, 000 MSCs por grama de gordura) [44]. Além disso, diferenciação e potências imunomoduladoras de AdMSCs são equivalentes às de BMMSCs [23].
A eficácia das AdMSCs no tratamento de várias doenças foi relatada in vivo [45]. Foi relatado que a administração local ou sistêmica de AdMSCs tem capacidade de reparo no infarto do miocárdio [19] lesão hepática [24], dano cerebral induzido por hipóxia-isquemia [46], rinite alérgica [47] e distrofia muscular [48]. Além disso, AdMSCs são imunorreguladores e potencialmente adequados para tratar doenças relacionadas ao sistema imunológico, incluindo GVHD [15], EM [16], doença reumática [17, 18] e tireodite [20].
Estabelecimento de procedimento padrão de expansão de cultura de hAdMSCs para aplicações clínicas
Devido ao pequeno número de MSC nos tecidos, a expansão ex vivo é necessária para gerar as quantidades celulares necessárias para alcançar resultados terapêuticos com MSCs através de entrega sistêmica. No caso de BMMSCs, no entanto, cultura de longo prazo altera a qualidade dos MSCs, incluindo alterações morfológicas, expressão atenuada de marcadores de superfície específicos, capacidade proliferativa reduzida, potencial de diferenciação [49–52], e atividade trófica [53].
Para produzir um número suficiente de hAdMSCs para terapia com células-tronco, condições de cultura otimizadas foram desenvolvidas [4], que permitem a proliferação de hAdMSC a partir de quantidades mínimas de gordura, uma vez que grandes quantidades de gordura raramente são obtidas de pacientes que sofrem de doenças incuráveis. O uso de um canular especial maximiza a taxa de sobrevivência das células-tronco nos tecidos adiposos e um 3 taxa vezes maior de fixação precoce subsequente de células-tronco quando comparada a outros dispositivos. A coleção de células desenvolvida, protocolo de cultivo e expansão requer menos de 5 g de gordura para obter mais de 109 células (depois 3 passagens). Para melhorar a proliferação e diferenciação do AdMSC, testamos mais de 15 meios de cultura disponíveis comercialmente e eventualmente desenvolveram o meio de cultura hAdMSC, nomeado como RCME (Mídia de anexo MSC) e RKCM (Mídia de proliferação MSC) [4]. Essas mídias proporcionam alta viabilidade, tempos de duplicação reduzidos e morfologia mantida e potência melhorada.
As características, estabilidade, toxicidade, e a tumorigenicidade das hAdMSCs expandidas por cultura foram determinadas em animais e em estudos humanos [4]. No que diz respeito à segurança de células-tronco expandidas em cultura in vitro, estabilidade genética e consistência na morfologia, imunofenotípico, e características de diferenciação, bem como toxicidade e tumorigenicidade precisam ser verificadas. Demonstramos que as hAdMSCs cultivadas mostraram o imunofenótipo típico e a capacidade de diferenciação das MSCs [4]; células expressaram marcadores MSC CD90, CD105, CD44 e CD29, mas não expressou marcadores hematopoiéticos ou endoteliais (CD31, CD34 e CD45) e diferenciado para adipogênico, osteogênico, neurogênico, linhagens miogênicas e condrogênicas in vitro. As hAdMSCs expandidas por cultura foram geneticamente estáveis por pelo menos 12 passagens conforme determinado pelo cariótipo e polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) ensaios.
Células suspensas em solução salina fisiológica mantiveram suas propriedades de MSC, viabilidade e potência em condições de armazenamento refrigerado (2 a 8°C) por pelo menos 72 h, um período de tempo crítico para o envio de células-tronco para a clínica. No entanto, notamos que a vibração física durante o transporte pode impactar negativamente a viabilidade celular. Nenhuma evidência de bactérias, fúngico, ou contaminação por micoplasma foi observada em células testadas antes do envio e a viabilidade celular avaliada por exclusão de azul de tripano foi > 95% antes do transplante celular.
Segurança in vivo de hAdMSCs expandidos
Para testar a toxicidade de hAdMSCs, diferentes doses de células foram injetadas por via intravenosa em imunodeficientes com imunodeficiência combinada grave (IDCG) ratos, e camundongos foram observados 13 semanas. Mesmo na dose celular mais alta (2.5 × 108 células/kg de peso corporal), ratos não mostraram sinais de desconforto. Embora a segurança da administração intravenosa. A injeção de MSCs autólogas e alogênicas expandidas por cultura foi confirmada em pacientes [54] em numerosos estudos clínicos humanos, incluindo osteogênese imperfeita [55], leucodistrofia metacromática [56], infarto agudo do miocárdio [57] e DECH [58], houve alguns relatos apresentando que as MSCs podem induzir sarcoma [59] ou facilitar o crescimento de tumores [60]. A fim de testar a tumorigenicidade de hAdMSCs, realizamos um teste de tumorigenicidade em camundongos Balb/c-nude para 26 semanas. Mesmo na dose celular mais alta (2 × 108 MSC/kg, injeção subcutânea), nenhuma evidência de desenvolvimento de tumor foi encontrada. A segurança das hAdMSCs foi investigada posteriormente em um ensaio clínico humano de fase I, sem nenhum evento adverso grave após i.v.. administração de 4 × 108 hAdMSCs dentro de um período de observação de 12 semanas [4]. Os eventos adversos menores encontrados são comuns em pacientes com lesão medular e desapareceram espontaneamente ou foram aliviados com medicação. Um caso idiopático de hipertireoidismo assintomático que não necessitou de tratamento médico permaneceu sustentado durante o acompanhamento. Com base nesses estudos, concluímos que a administração sistêmica de hAdMSCs é segura e não induz o desenvolvimento de tumores. De acordo com esses dados, Vilalta e cols.. [61] relataram que hAdMSCs implantados em camundongos tendiam a manter um estado estacionário, e nenhuma anormalidade cromossômica detectável ou tumores formados durante o 8 meses de residência nos tecidos do hospedeiro. Notavelmente, o desenvolvimento de sarcoma no estudo de Tolar et al foi devido a MSCs expandidas por cultura citogeneticamente anormais [59]. Além disso, Izadpanah e outros. [62] demonstraram que o cultivo a longo prazo de MSC além da passagem 20 pode resultar na sua transformação em células malignas. Estes resultados indicam que é essencial controlar a estabilidade genética de células expandidas em cultura.
Comparação da diferenciação de células neurais de hAdMSC derivadas de doadores jovens e idosos
Porque muitas doenças candidatas à terapia com células-tronco são doenças degenerativas associadas à idade, células-tronco obtidas de idosos para uso autólogo devem possuir potência para ter efeitos terapêuticos. Em termos de BMMSCs, houve resultados controversos sobre os efeitos do envelhecimento. Usando BMMSCs humanos de juvenis e adultos semeados em andaimes tridimensionais, Mendes e cols.. [63] demonstraram que a formação óssea real diminuiu significativamente à medida que a idade do paciente aumentou. Huibregtse et al. [64] demonstraram que a redução geral na eficiência de formação de colônias foi observada em BMMSCs de coelhos derivados de animais mais velhos. Bergman et al.. [65] demonstraram que diferenças nas taxas de proliferação basal foram observadas entre BMMSCs jovens e velhos isolados de camundongos, enquanto a produção de marcadores precoces de diferenciação osteoblástica in vitro foi equivalente. Stenderup et al.. [42] mostraram que BMMSC humanos isolados de doadores mais velhos têm uma expectativa de vida reduzida e uma taxa de duplicação da população, enquanto ambos os BMMSCs formaram quantidades semelhantes de osso tanto in vitro como in vivo [51].
As MSC derivadas do tecido adiposo parecem não sofrer o mesmo padrão de senescência que as BMMSC [66, 67]. Quando hAdMSC foram derivados de idosos (significar 71.4 anos) e jovens doadores (significar 36.4 anos), células de ambas as faixas etárias mostraram proliferação semelhante, diferenciação osteogênica e padrões de marcadores de senescência, enquanto BMMSC das mesmas coortes mostrou proliferação reduzida, diminuição da diferenciação e aumento da senescência [66]. Em concordância com esses achados estão os dados de AdMSC murino derivados de camundongos SAMP6 osteoporóticos senis, que mostrou manutenção do comprimento dos telômeros, atividade da telomerase e diferenciação osteogênica [67]. Para determinar a potência de hAdMSCs isoladas de doadores com trinta anos, quarenta e cinquenta, seu potencial de proliferação e diferenciação para células neurais foi investigado [5]. Foi demonstrado que o número de células, viabilidade, a morfologia e o potencial de diferenciação neural não foram diferentes entre hAdMSC de diferentes idades e passagens. Os resultados sugerem que células-tronco autólogas derivadas do tecido adiposo de pessoas idosas podem ser aplicadas na terapia com células-tronco de doenças neurais dependentes da idade, com a mesma qualidade e capacidade de células-tronco que as células-tronco derivadas de pacientes mais jovens..
Distribuição, potencial de migração e retorno de MSCs transplantadas após injeção intravenosa
Distribuição de MSCs após i.v.. injeção
Depois de i.v.. entrega, As MSCs são geralmente encontradas em frequências baixas ou muito baixas na maioria dos órgãos-alvo, como mostrado pela histologia, reação em cadeia da polimerase ou por imuno-histoquímica [68–70]. Deak e outros. [71] realizaram avaliações cinéticas sistemáticas em modelos sem lesões usando MSCs murinas transfectadas com proteína fluorescente verde aprimorada. Eles demonstraram que 24 horas após a aplicação do MSC, os órgãos mais frequentemente positivos foram os pulmões, fígado, rim, pele, e intestino entre os tecidos investigados. Em babuínos, Devine et al.. [69] demonstraram que alta concentração de DNA específico para transplante foi observada em tecidos gastrointestinais. Eles também mostraram que o rim, pulmão, fígado, timo, e a pele têm quantidades relativamente altas de equivalentes de DNA. Com base em seus estudos, níveis de enxerto nesses tecidos foram estimados, variando de 0.1 para 2.7%, com resultados semelhantes com células autólogas e alogênicas [69]. Após administração sistêmica, Lee e outros. [28] encontrado 80% das MSCs infundidas nos pulmões de camundongos 15 minutos após a infusão, enquanto depois 4 dias o sinal específico para a presença de MSCs humanas diminuiu para 0.01%. De importância, estudos clínicos com MSCs humanas administradas sistemicamente não induziram sintomas de intolerância significativos nos sistemas pulmonar ou circulatório, enquanto MSCs murinas exibiram um comportamento um pouco diferente. Deak e outros. [72] demonstraram em um modelo de transfusão de MSCs murinas singênicas C57BL/6, que, em contraste com MSCs humanas, MSCs murinas chegam aos pulmões e podem entupir os pulmões.
Potencial de migração e retorno de MSCs após i.v.. injeção
Vários estudos in vivo demonstraram que as CTMs infundidas sistemicamente poderiam migrar para áreas lesionadas., tecidos inflamados e exercem efeitos terapêuticos [73, 74]. BMMSCs administradas por via intravenosa a ratos após infarto do miocárdio localizam-se na região do infarto e melhoram a função ventricular, enquanto as MSCs entregues a ratos não infartados localizam-se no BM [75]. A irradiação localizada do abdômen aumenta significativamente o direcionamento do MSC especificamente para tecidos lesionados por radiação em camundongos [76]. Um estudo recente demonstrou as propriedades de retorno de i.v.. administrou hAdMSCs em áreas danificadas por células em um modelo animal de rinite alérgica [47]. A distribuição relativa de órgãos de hAdMSCs marcadas com fluorescência foi avaliada por nós no cérebro, medula espinhal, baço, timo, rim, fígado, pulmão, e coração após i.v.. injeção em ratos com lesão medular por microscopia de fluorescência e Alu PCR específico para humanos. Na região lesionada da medula espinhal, uma porcentagem relativamente alta de AdMSCs (13%) foi encontrado, enquanto a maioria das células permaneceu no baço (40%) e timo (21%) [dados não mostrados].
Numerosos estudos mostraram o envolvimento de quimiocinas ou fatores de crescimento no tráfico de MSCs para a região lesionada. As interações do fator-1α derivado de células estromais (SDF-1α)- e tipo de receptor de quimiocina C-X-C 4 (CXCR4) mediou o tráfico de BMMSCs transplantadas em um modelo de rato com lesão do nervo hipoglosso esquerdo. Além disso, BMMSCs foram atraídas por quimiocinas que são apresentadas nos sobrenadantes de culturas primárias de cultura de ilhotas pancreáticas humanas in vitro e in vivo[77]. Quando comparamos fatores solúveis por ensaio de migração in vitro, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF)-AB e fator transformador de crescimento-ß1 (TGF-β1) foram mais potentes para a atividade de migração de hAdMSCs [78]. hAdMSCs pré-estimuladas com fator de necrose tumoral (TNF-α) mostrou a maior atividade de migração. Quando analisado por citometria de fluxo e reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa, hAdMSC expressou tipo de receptor de quimiocina CC 1 (CCR1), CCR7, Tipo de receptor de quimiocina C-X-C 4 (CXCR4), CXCR5, CXCR6, EGFR (Receptor EGF), FGFR1 (Receptor FGF 1), TGFBR2 (Receptor de TGF 2), TNFRSF1A (Receptor de TNF 1), PDGFRA (Receptor PDGF A) e PDGFRB (Receptor B de PDGF) nos níveis de proteína e mRNA. Este estudo indica que a migração de hAdMSCs é controlada por vários fatores de crescimento ou quimiocinas. Por isso, modular a capacidade de retorno de hAdMSCs in vivo poderia estimular sua migração para locais feridos após administração intravenosa. administração, e assim melhorar o seu potencial terapêutico.
Efeitos de imunomodulação e anti-inflamatórios por MSCs
Várias características podem desempenhar um papel na capacidade regulatória imunológica e nos efeitos antiinflamatórios das CTMs: 1) As MSCs têm baixa imunogenicidade devido aos baixos níveis de expressão do complexo principal de histocompatibilidade-I (MHC-I) e nenhuma expressão de moléculas MHC-II e moléculas coestimulatórias, incluindo B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), ou CD40 [79], (2) MSCs secretam fatores solúveis, como interleucina (IL)-6 e fator estimulador de colônias de macrófagos [80] e suprimir a ativação e proliferação de linfócitos T e B, e interfere na diferenciação, maturação e função das células dendríticas, (3) As MSC libertam moléculas anti-inflamatórias e anti-apoptóticas e, portanto, podem proteger tecidos danificados [79, 81].
Devido a essas propriedades, O transplante de MSC tem sido utilizado para o tratamento da DECH, e várias doenças autoimunes, incluindo tireodite autoimune [20], RA [17, 18] e EM [16] e implicado no transplante alogênico de células-tronco. A infusão sistêmica de AdMSCs controlou a DECH letal em camundongos transplantados com enxertos de células-tronco hematopoiéticas haploidênticas quando as MSCs foram injetadas logo após o transplante [15] embora os estudos clínicos em andamento com BMMSC alogênico não tenham tido sucesso. A eficácia terapêutica dos BMMSCs foi relatada no modelo animal de EM [16]. Nesta encefalomielite autoimune experimental (EAE) modelo, 4.. a infusão de MSCs diminuiu os sintomas clínicos quando as MSCs foram injetadas antes ou no início da doença. Em uma artrite experimental induzida por colágeno (CIA) estudar, uma única injeção intraperitoneal de BMMSCs evitou a ocorrência de artrite grave, e foi associado a uma diminuição nos níveis séricos de citocinas pró-inflamatórias [18]. Demonstrou-se que AdMSCs humanas melhoram a tireoidite autoimune experimental por meio da regulação negativa de citocinas Th1 [20]. A infusão sistêmica de hAdMSCs preveniu a infiltração de linfócitos nas glândulas tireoides, diminuiu a produção de citocinas pró-inflamatórias e melhorou o equilíbrio Th1/Th2 [20]. As MSCs suprimiram a proliferação de células T e a produção de citocinas em resposta ao aloantígeno e ao antígeno inespecífico, e prolongar a sobrevivência do enxerto de pele in vivo [82]. Além disso, MSCs inibem a função das células B [83], células assassinas naturais [84] e células dendríticas [85]. A função imunomoduladora das CTM foi mediada tanto por fatores solúveis [86], e por interações diretas célula a célula [87].
Se as CTM derivadas de pacientes com doenças autoimunes terão funções terapêuticas após o transplante autólogo em uma situação clínica é controverso e não foi abordado clinicamente [88]. Papadaki e outros. [89] mostraram que, embora as BMMSCs isoladas de pacientes com AR tenham sido prejudicadas em sua capacidade de apoiar a hematopoiese, BMMSCs isolados de pacientes com EM apresentaram capacidade normal [89, 90]. Outros dados demonstraram que BMMSCs derivados de pacientes com AR, EM, LES autoimune, esclerose sistêmica (ES) e a síndrome de Sjogren mantiveram suas capacidades imunomoduladoras in vitro [91, 92].
Aplicação clínica de MSCs em doenças autoimunes
Dada a sua segurança in vivo confirmada e a justificativa de que as MSCs possuem propriedades imunomoduladoras e anti-inflamatórias, tratamentos de uso compassivo para doenças autoimunes foram iniciados em pacientes depois que outras opções de tratamento foram esgotadas. Todos os pacientes forneceram consentimento informado para o tratamento. Aqui, descrevemos o tratamento de AdMSCs na perda auditiva autoimune (AIED), EM, PM, AD e RA. Detalhes sobre a doença dos pacientes e históricos de tratamento, o estado da doença e os tratamentos são fornecidos na Tabela 1 e arquivo adicional 1; Relatos de Casos, Tabela S1 e Figura S1. Pontuações clínicas adicionais para DA antes e depois do tratamento são mostradas na Tabela 2. A análise dos pacientes foi baseada principalmente em parâmetros clínicos. Em alguns casos, parâmetros imunológicos e de estado sanguíneo também foram medidos (casos 3, 4, 5, 8, 9, 10); todos os casos mostraram diminuição nas respostas inflamatórias e na contagem de eosinófilos.
Mesa 1 Resumo dos tratamentos hAdMSC de 10 pacientes com diferentes doenças autoimunes associadas.
Mesa 2 Resultados de SCORing de pacientes com DA.
Para todos os tratamentos, 5 g de tecido adiposo foram coletados por lipoaspiração, transferido imediatamente para as instalações GMP e Centro de Pesquisa de Células-Tronco da RNL BIO e expandido em cultura para 3 passagens usando o protocolo padrão para obter AdMSCs [4]. Os pacientes receberam entre 1 e 6 4.. infusões de 200 milhões de AdMSCs suspensos em solução salina fisiológica (cada 100 milhões de células/100 ml) em intervalos diferentes (veja tabela 1 e arquivo adicional 1; Relatos de Casos). Dois pacientes receberam administração intratecal adicional (Paciente com EM) e intraarticular (Paciente com AR) injeções de células (Mesa 1 e arquivo adicional 1; Relatos de Casos e Tabela S1).
Conclusões
AdMSC humano pode ser isolado de pequenas quantidades de tecido adiposo, expandido de forma eficiente para atingir mais de 109 células depois 3 para 4 passagens independentes da idade do doador e do estado da doença. A potência sustentada e a estabilidade genética das células tornam o tecido adiposo uma fonte muito atraente para células multipotentes.. Sua função imunomoduladora, padrões de localização e migração, bem como ensaios clínicos anteriores sugerem que essas células são eficientes para o tratamento de diversas classes de doenças autoimunes e sua aplicação é segura. Aqui, demonstramos efeitos terapêuticos consideráveis de AdMSCs autólogas expandidas por cultura em uma variedade de doenças autoimunes no âmbito de uma aplicação de uso compassivo eticamente justificada para pacientes com opções terapêuticas esgotadas. Múltiplas infusões intravenosas de células resultaram em benefício clínico em todos os pacientes tratados no período de acompanhamento. Nenhum evento adverso foi observado. Os dados fornecem a primeira evidência de benefício clínico em doenças autoimunes, ainda é necessário um exame mais aprofundado em ensaios clínicos controlados com um número suficiente de pacientes para tirar uma conclusão definitiva sobre a eficácia terapêutica e o benefício a longo prazo. Importante, os dados mostram que múltiplas infusões de AdMSC de até 1 × 109 células em um período inferior a um mês é seguro, corroborando dados de ensaios pré-clínicos e clínicos usando BMMSC e AdMSC. Além disso, dentro deste pequeno tamanho de amostra, nenhuma evidência de eficácia dependente da idade do doador, ou taxa de expansão celular in vitro dependente da idade foi encontrada. A aplicação de células-tronco autólogas descrita aqui é baseada no estado atual da técnica e fornece uma perspectiva de tratamentos para pacientes que sofrem de uma variedade de doenças autoimunes incuráveis, sem opções de tratamento restantes..
Embora seja mostrado aqui que a tecnologia para tratamento de doenças autoimunes usando AdMSC autólogo está em vigor e as expectativas derivadas de estudos pré-clínicos podem ser confirmadas, ainda há uma compreensão limitada dos modos de ação. Para concluir, a infusão sistêmica de células-tronco autólogas descrita aqui oferece uma promessa para um melhor manejo de um amplo espectro de doenças autoimunes, independente da idade do paciente.
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