Terapia de células madre de la neurodegeneración en la ataxia tipo oculomotor apraxia 2 y ataxia cerebelosa

 

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La ataxia tipo oculomotor apraxia 2 (AOA2) es una rara enfermedad autosómica recesiva ataxia cerebelosa. La evidencia reciente sugiere que la proteína defectuosa en este síndrome, senataxina (SETX), funciones en el procesamiento del ARN para proteger la integridad del genoma.

Hasta la fecha, sólo las células linfoblastoides derivados del paciente, fibroblastos y células Setx knockdown estaban disponibles para investigar AOA2. interrupción reciente del gen Setx no dio lugar a defectos de comportamiento neurológico o la neurodegeneración, por lo que es difícil estudiar la etiología de AOA2.

 

tratamiento Ataxia con células madre

Las células madre thery se combinan con especializado terapia para la ataxia, que no sólo se centra en ayudar al paciente a hacer frente a sus síntomas, sino que también trata la causa directa de los síntomas, contribuir a la curación de la lesión cerebral traumática. We believe that comprehensive approach to ataxia stem cell therapy gives patients a high chance of improvement, lo que les permite mejorar su calidad de vida.

Stem programa de tratamiento de células se puede aplicar a varios tipos de ataxia, incluyendo SCA1, SCA2, SCA3, SCA6, AOA1, AOA2, La ataxia Frederick, que es causada por lesión en la cabeza, y mucho más.

What are the potential improvements in the stem cell treatment?

El objetivo del tratamiento es curar la lesión cerebral causado por la enfermedad, para restaurar la función neurológica.

Hay varios tipos de mejoría después de nuestro tratamiento y nuestros pacientes anteriores tenía la siguiente *:

La mejora de equilibrio y la coordinación
La reducción de la fatiga
Mejora del habla
Disminución de los temblores
Mejora de la función del aparato motor
Mejora de la deglución
Disminución del dolor neuropático
Mejora la agilidad mental

atrofia Agitated del cerebro con MRI.

En años recientes, terapia con células madre ha convertido en el tratamiento de una enfermedades tales puntos de acceso. Las células madre mesenquimales obtenidos fácilmente por amplificación in vitro pueden ser mucho en el largo plazo in vitro. El proceso de cultivo para mantener su pluripotencia bajo ciertas condiciones puede ser capaz de diferenciar en las células nerviosas y puede secretar una variedad de factores neurotróficos, para promover la reparación de las células nerviosas. En la terapia de células madre, para superar la adquisición de las células madre neurales a partir de tejidos cerebrales en adultos de peligro y limitaciones, sino también a evitar el trasplante de cerebro fetal en presencia de ética, rechazo inmunológico, limitadas fuentes de problemas, no hay toxicidad aguda o crónica y tumorigenicidad en el cuerpo puede contribuir a la reparación de nervios dañados.

Con la ayuda de la tecnología de células madre y rara vez se utiliza en un hospital clínico.

tejidos de sangre o grasa entre las células madre mesenquimales autólogas tempranas para tratar lesiones de la médula espinal y otras lesiones neurológicas y lograron resultados positivos. Now investigators use an alternative cord umbilical cord, no sólo para obtener un número suficiente de células madre mesenquimales también se pueden congelar, restauración de la pre-aplicación, un corto tiempo de montar un número suficiente de células madre utilizadas en la terapia clínica, incluso si el paciente ha eliminado la extracción de dolor cerebro, sino que también reduce el tiempo de espera para el cultivo celular.

Y en la práctica clínica se ha demostrado su fiabilidad y seguridad, y no una respuesta inmune. Clinical application can be obtained from autologous mesenchymal stem cells to treat the same effect.

Los casos con ataxia cerebelosa síntomas en pacientes con enfermedades neurodegenerativas de las células madre mesenquimales entre la terapia de inyección subaracnoidea umbilical después del tratamiento de los pacientes con movimiento, equilibrar, idioma, escritura tales como la capacidad de tener diferentes niveles de recuperación, la mejora de la calidad de vida, disminuyó significativamente después de un gran escala las puntuaciones de tratamiento Internacional ataxia y ADL (PAG <0.05), y no hay reacciones adversas.

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Terapia de células madre en Ucrania

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Más información sobre la terapia de células madre de la Ataxia y la investigación científica

La ataxia tipo oculomotor apraxia 2 (AOA2) fue descrito por primera 15 Hace años y, posteriormente, localizado en el cromosoma 9.

Para desarrollar un modelo neuronal más relevante para estudiar la neurodegeneración en AOA2, investigadores derivan progenitores neurales de un paciente con AOA2 y un control por células madre pluripotentes inducidas (IPSC) la reprogramación de células. AOA2 iPSC y progenitores neurales muestran niveles de daño oxidativo aumentaron, ADN doble filamento se rompe, la muerte celular el daño inducido por el aumento de ADN y la acumulación R-bucle. expresión de todo el genoma y el análisis de red de genes co-expresión ponderado en estos progenitores neurales identificados tanto previamente reportados y novedosas afectados genes y las vías celulares asociados con la disfunción senataxina y la fisiopatología de la AOA2, proporcionar una mayor comprensión de la función de senataxina en la regulación de la expresión de genes en un genoma de gran escala. Estos datos muestran que células iPS pueden ser generados a partir de pacientes con la ataxia autosómica recesiva, AOA2, diferenciarse en neuronas, y que ambos tipos de células recapitulan el fenotipo celular AOA2. Esto representa un nuevo y apropiado sistema modelo para investigar la neurodegeneración en este síndrome.

Las células madre con origen mesenquimal son células inicialmente apareciendo en las primeras etapas de la vida intrauterina como las células que se diferencian en todas las demás células. También fueron responsables de la producción de células sanguíneas en esa etapa temprana. Las células de los diferentes sistemas funcionales formados durante la fase fetal eran células madre antes de su transformación. Las células como células condrogénicas, células neurogénica, y las células osteogénicas vienen a la mente.

 

Este trastorno se caracteriza por la atrofia cerebelosa progresiva, neuropatía periférica, apraxia oculomotor en ~ 50% de los pacientes y los niveles de alfa-fetoproteína elevadas con una edad de inicio entre 10 y 20 años .

El gen defectuoso en AOA2 fue identificado como SETX codifica senataxina, un 2667 proteína aminoácidos que contiene un dominio de siete motivo C-terminal altamente conservada de la superfamilia 1 de ADN helicasas / ARN y un dominio N-terminal importantes para las interacciones proteína-proteína .

El uso de células linfoblastoides y fibroblastos de pacientes AOA2 y células como sistemas modelo SETX-RNAi-agotado, papeles para senataxina han descubierto que abarcan (yo) protección contra el daño de ADN , (ii) regulación de la transcripción incluyendo terminación de la transcripción, splicing efficiency of specific mRNAs and alternate splice site selection and R-loop resolution and (iii) localización en la interfaz de la transcripción y la replicación .

R-bucles son híbridos de ARN / ADN que se forman sobre los sitios de transcripción de pausa por la interacción con una plantilla de ssDNA detrás de un complejo de ARN Pol II alargando, que son potencialmente dañinos y puede causar inestabilidad genómica si se deja sin resolver. Un papel para senataxina en la transcripción de elongación y terminación se ve apoyada por un informe, que muestra que las células con pantalla knockdown senataxina un aumento de la lectura completa de ARN y la densidad de ARN Pol II aguas abajo de la poli(UN) sitio y también exhiben niveles de R-loop formación aumentó . Senataxina se encontró para localizar a focos nucleares distinta en células en fase S / G2, y el número de estos focos aumentó en respuesta a la replicación alterada, lo que sugiere que senataxina se localiza en sitios de colisión entre el aparato de transcripción y los componentes de la replisome .

en adición, una interacción SUMO-dependiente entre senataxina y Rrp45, un componente central de la exosome, También se demostró que co-localizar en focos nuclear correspondiente a los sitios de R-bucles, lo que sugiere que conecta la transcripción senataxina, daño del ADN y ARN de vigilancia .

Generación y caracterización de células madre AOA2 iPSC
Con el fin de optimizar las condiciones y para reducir el riesgo de la inestabilidad cromosómica, used early passage (PAG < 5) fibroblastos para la reprogramación. Después de la transfección con pEP4EO2SCK2MEN2L y pEP4EO2SET2K plásmidos episomales, stepwise adapted the cells to knockout serum replacement (Koshri) medio en los primeros 4-5 días de generación iPSC, como reemplazo directo con el medio KOSR fue encontrado para dar lugar a una extensa muerte de los fibroblastos AOA2.

Después 2 semanas, transducidas paciente AOA2 y fibroblastos de control emparejados dieron lugar a colonias de células redondas pequeñas con una alta relación de núcleo a citoplasma típico de las células madre humanas pluripotentes

Although data show that it was possible to reprogram AOA2 fibroblasts, la eficacia se redujo un tanto en comparación con la de los controles. Trece colonias de la paciente homocigoto AOA2 que expresa el marcador de superficie celular TRA-1-60 madre

se expandieron para su posterior análisis. Dos de estos clones AOA2, AOA2(C7) y AOA2(C8), se seleccionaron para su posterior análisis como estos clones muestran expresión robusta de la pluripotencia marcadores TRA-1-60, TRA-1-81, Nanog y Oct4

control de los clones se seleccionaron de manera similar como se describe anteriormente y conformado a los mismos criterios. La presencia de la c.6109 A>G missense homocigotos mutación en AOA2 iPSC se confirmó en los niveles de mRNA mediante secuenciación , y se observó un cariotipo normal para AOA2(C7) y AOA2(C8) clones iPS

Oct4, NANOG y la expresión de Sox2 en el AOA2 iPSC no se derivan de plásmidos de reprogramación integrados o persistentes como (yo) reacción en cadena de la polimerasa (PCR) análisis de ADN genómico no reveló amplicones siguiente 36 rondas de PCR usando cebadores anclados-IRES diseñados para amplificar la OCT4 genes de reprogramación, Sox2, Lin28, KLF4 y c-MYC (plásmidos utilizados como controles positivos) y (ii) la transcriptasa inversa (RT)análisis -PCR de ARN aislado de la AOA2 y control iPSC mostró una ausencia de expresión de los transgenes (fibroblastos humanos transfectadas transitoriamente con los plásmidos de reprogramación utilizados como control positivo)

 

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