واتساب: +447778936902 , +33745637397, +34670491885
الضمور البقعي المرتبط بالعمر：خلايا RPE
في أعيننا，ظهارة الصباغ الشبكية，في الضمور البقعي المرتبط بالعمر，أيه إم دي)，سوف تفقد الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية وظيفتها تدريجيًا，ويسبب موت المستقبلات الضوئية في البقعة，تؤثر على الرؤية وتؤدي في النهاية إلى العمى。إذا تم اكتشاف المرض مبكراً，يمكن علاجه بأدوية عامل نمو بطانة الأوعية الدموية (anti-VEGF).。
تدرس المجموعة البحثية لماسايو تاكاهاشي (المعروفة أيضًا باسم ماساداي تاكاهاشي) في معهد الفيزياء والكيمياء في اليابان جدوى زرع صفائح الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية المتمايزة (iPS-RPE) في المرضى الذين يعانون من AMD الرطب.。جمع الخلايا الليفية الجلدية من مريضين يعانون من AMD المتقدم，التحضير في خلايا iPS-RPE。في هذين المريضين，تلقى مريض واحد عملية زرع صفائح خلايا iPS-RPE ذاتيًا。1 سنة بعد الجراحة，تؤكد الشرائح الرقيقة من خلايا RPE المزروعة نجاح عملية الزرع，يتم الحفاظ على الرؤية。
الدراسات السريرية اللاحقة，نفس فريق البحث，زرع خلايا RPE المحضرة من بنوك خلايا HLA-homo iPS إلى مرضى AMD الرطب المتطابقين مع HLA。المنشطات الموضعية，لم يتم استخدام مثبطات المناعة。في جميع حالات الزرع الخمس，بعد 1 سنة من فترة المراقبة，تأكيد بقاء الخلايا المزروعة，وعدم وجود نمو غير طبيعي。في التجارب السريرية，وشملت الأحداث السلبية الملحوظة التهاب خفيف、يشتبه في رفض معتدل、وذمة الشبكية、انفصال الظهارة القرنية والتهاب باطن المقلة العقيم。وتشير النتائج المؤقتة，بعد 1 سنة من المتابعة，يعتبر زرع خلايا iPS-RPE الخيفي المطابق لـ HLA آمنًا，والبقاء على قيد الحياة بشكل مستقر。
-02-
نقص الخلايا الجذعية الحوفية：ورقة القرنية
سبب بقاء القرنية شفافة，تساهم الخلايا الظهارية الموجودة على سطحها كثيرًا。تنمو الخلايا الظهارية القرنية البشرية باستمرار，يتم تحديثها باستمرار，مصدر الحفاظ على هذا التجديد هو الخلايا الجذعية الحوفية。عندما تكون الخلايا الجذعية الحوفية ناقصة (أي نقص الخلايا الجذعية الحوفية，نقص الخلايا الجذعية الحوفية，إل إس سي دي)，يسبب فقدان الظهارة القرنية المستمر，الأوعية الدموية القرنية、عدوى قرحة القرنية、معتم，الحالات الشديدة قد تسبب ثقب القرنية、حتى تعرض مقلة العين بأكملها للخطر，تسبب العمى。تم استخدام عمليات زرع القرنية من متبرع لعلاج الأمراض الظهارية القرنية الشديدة التي يمكن أن تؤدي إلى العمى，ولكن هناك أيضًا مشاكل الرفض ونقص المانحين。
استخدم كوجي نيشيدا، طبيب العيون في جامعة أوساكا في اليابان، وفريقه طبقات أنسجة القرنية المشتقة من iPSC لإصلاح القرنيات التالفة.。فريق بحثي يطور نظام استزراع ثنائي الأبعاد "طريقة SEAM"，إعادة بناء الأنسجة لجميع الهياكل الشبيهة بالعين من خلال تعزيز التمايز الذاتي لخلايا iPS。تشكل هذه الورقة من الخلايا مجموعة الخلايا الرئيسية في العين (بما في ذلك ظهارة القرنية).、ظهارة الشبكية والعدسة) تحدث في مناطق محددة من الأنسجة。يقوم فريق البحث بعزل الخلايا السلفية الظهارية القرنية من هياكل الأنسجة ثنائية الأبعاد，ونجحت في توليد الأنسجة الظهارية الوظيفية للقرنية。
دراسة سريرية للعلاج بالخلايا iPSC في اليابان رسم تخطيطي لعلاج iPSC لنقص الحوفي
قام فريق البحث بزراعة الأنسجة الظهارية للقرنية المحضرة من الخلايا الجذعية المحفزة متعددة القدرات البشرية في نماذج حيوانية，تأثير علاجي مثبت。من يوليو 2019 إلى ديسمبر 2020，استخدم فريق البحث هذا أنسجة القرنية الشبيهة بالفيلم المعتمدة على iPSC بسمك 0.05 مم，تم الانتهاء من أول دراسة سريرية في العالم لزراعة أربعة مرضى يعانون من "نقص الخلايا الجذعية الحوفية" والذين فقدوا بصرهم تقريبًا。
وبعد سنة واحدة من المراقبة والمتابعة،，ولم تحدث أي مشاكل مثل رد فعل الرفض والسرطان，سلامة مؤكدة。تحسنت أعراض جميع المرضى，تحسنت حدة البصر المصححة في 3 منهم，ارتفع عدد المرضى من 0.15 إلى 0.7。
-03-
مرض باركنسون：الخلايا السلفية العصبية الدوبامين
معظم الثدييات，يكتمل الدماغ في الغالب خلال الفترة الجنينية，يستمر جزء صغير فقط من الأعصاب في التطور بعد الولادة。يمكن أن يؤدي المرض الناجم عن تلف الأعصاب إلى إعاقة دائمة，تعد كيفية استخدام iPSCs لإصلاح الجهاز العصبي حاليًا موضوعًا بحثيًا ساخنًا في العلاج بالخلايا الجذعية.。
الخلايا العصبية الدوبامينية متمايزة عن iPSCs التي وجدت لعلاج مرض باركنسون。مرض باركنسون هو مرض ناجم عن انحطاط الخلايا العصبية التي تفرز الدوبامين في المنطقة تحت السوداء في الدماغ.。مرض باركنسون يأتي في المرتبة الثانية بعد مرض الزهايمر，ثاني أكثر أمراض التنكس العصبي شيوعًا。في الولايات المتحدة，الخطر مدى الحياة بالنسبة للرجال هو 2٪，1.3% للنساء。
بحث سريري حول العلاج بالخلايا iPSC في اليابان
رسم تخطيطي لعلاج iPSC لمرض باركنسون
جون تاكاهاشي، معهد أبحاث الخلايا الجذعية، جامعة كيوتو، اليابان，أطلق فريق البحث (زوج تاكاهاشي ماساداي) تجربة سريرية باستخدام الخلايا السلفية العصبية الدوبامين المشتقة من iPSC لعلاج مرض باركنسون في أغسطس 2018.。الخلايا المزروعة في التجارب السريرية تأتي من بنك خلايا HLA-homo iPS。يتم تحفيز خلايا البذور iPSC للتمييز，وتم فرز الخلايا الإيجابية للكورين وتنقيتها بواسطة قياس التدفق الخلوي (الكورين هو علامة سطح الخلية للخلايا السلفية العصبية الدوبامين)。قام فريق البحث بحث الخلايا iPSCs الخيفي المتطابقة مع HLA على التمايز إلى خلايا سلفية عصبية من الدوبامين，بالاشتراك مع جرعة منخفضة من مثبطات المناعة，من خلال جراحة الدماغ الموضعية، يتم زرع ما يقرب من 5 ملايين خلية متمايزة في الأجزاء القشرية اليسرى واليمنى من الجسم المخطط لدماغ المريض.。
قبل التجارب السريرية，先证实了移植的人类iPSC来源的多巴胺神经祖细胞在帕金森病的食蟹猴模型中的有效性和安全性。经过两年的跟踪，没有观察到猴子肿瘤的形成，也没有发现任何恶性转化的证据，سلامة مؤكدة。تظهر النتائج：移植的猴子运动活动增加，帕金森病症状有所改善。PET分析显示，الخلايا المزروعة تصنع الدوبامين في الدماغ。
-04-
إصابة الحبل الشوكي：الخلايا السلفية العصبية
إصابة الحبل الشوكي，يشير عادة إلى التأثيرات الخارجية على الحبل الشوكي，يسبب شللاً جزئياً أو كلياً للمنطقة المصابة وما دونها，جعل المريض معاقاً بشكل دائم。إصابة الحبل الشوكي هي صدمة شائعة نسبيا。تكمن صعوبة علاج إصابة النخاع الشوكي في إعادة بناء التوصيل العصبي واستعادة الوظيفة الحركية.。
日本庆应大学生理学 Hideyuki Okano（岡野荣之）研究小组于2019年2月被批准开展使用采用iPSC来源神经祖细胞治疗亚急性期脊髓损伤的临床研究。但由于COVID-19疫情原因，研究被延后至2021年年底才得以开展。临床试验移植的细胞来自HLA-homo iPS细胞库。临床试验选择的适应症，为亚急性脊髓损伤（C3/4-Th10水平，损伤后14-28天内），共纳入4名受试患者。试验的主要目的是评估hiPSC-NS/PC移植细胞和移植方法的安全性。次要目标是获得其对神经功能和生活质量影响的初步证据。
بحث سريري حول العلاج بالخلايا iPSC في اليابان
iPSC治疗脊髓损伤的临床概要
细胞来源：试验使用的细胞来源是iPSC-神经祖细胞。
细胞处理：
在预定的移植手术前4天，细胞将进行解冻复苏，经过培养和洗涤处理后，200万个细胞重悬在20μL的人工脑脊液中，保持在4°C环境，直到移植。
移植方式：
移植中患者接受全麻，通过术前MRI和术中超声辅助，细胞在手术显微镜下通过神经注射器移植到损伤部位的中心。
-05-
心力衰竭：心肌薄片
心力衰竭（heart failure）简称心衰，是由于心脏泵血力量不足导致的一种心脏疾病。缺血性心脏病是由于冠状动脉阻塞引起心肌组织慢性缺血，从而导致功能性心肌细胞坏死。لكن，成熟的心肌细胞是不能自我更新的，缺血和坏死区域的心肌逐渐被纤维组织所取代。لذلك，补充功能性心肌细胞是延缓心衰进程的一种合理方法。因为心肌细胞没有增殖能力，难以大量产生。لذلك，骨骼肌细胞、骨髓单个核细胞和间充质干细胞（MSCs）都是候选细胞，被用于替代心肌细胞，并进行了动物实验和临床试验。
起初，细胞片由自体骨骼肌细胞制造的，可以直接贴到心脏表面。治疗机制主要依靠细胞片旁分泌的营养因子和细胞片细胞与宿主心肌融合。لكن，因为是自体个性化移植，缺点很明显：一是患者需要等待时间长，二是制作成本较高。لذلك，开发一种通用型标准化现货性产品，尤为重要。细胞薄片，便是这样一种产品，通过HLA配型后的iPSC衍生的心肌细胞薄片，可当做通用型产品。
在动物实验中，研究发现人类胚胎干细胞衍生的心肌细胞在组织学上和电生理学上都能与宿主心肌匹配结合，这与以前移植的非心肌细胞不同。在猴子实验，也显示了其生存能力和功能的改善。在猴子心肌梗死模型中，HLA匹配的猴子iPSC来源的心肌细胞即使在移植后12周仍能存活，并产生宿主心脏的功能改善。لكن，在所有的猴子中都观察到一些室性心律失常，这表明处理移植前的心律失常的影响是必要的。
بحث سريري حول العلاج بالخلايا iPSC في اليابان
在日本，HEARTSHEET® 的发明者之一，大阪大学的外科医生 Yoshiki Sawa教授通过 iPSC制成心肌细胞薄片，用于治疗猪的心力衰竭。研究小组研究了心脏功能改善的机制，包括分析了iPSC来源的心肌细胞的旁分泌因子。研究小组通过HLA-homo iPS 细胞成功制备了大量高度安全的心肌细胞薄片，可以用于人体移植。في الوقت الحالي，研究小组正在进行一项临床试验，以验证心肌细胞薄片治疗心力衰竭的安全性和有效性（jRCT2053190081）。临床适应症是缺血性心脏病，招募10个病人。
-06-
血小板减少症：血小板
在日本，每年临床需要超过170万升血小板，主要献血者捐赠。尴尬的是，血小板在采血后只能保存4天。由于新生儿出生率下降和人口老龄化，献血者群体的数量正在减少，但需要血小板的老年人群体数量正在增加。未来，不仅是血小板制剂，而且输血制剂也可能出现供应不足的情况。
通常，再生障碍性贫血（即“再障”）或其他疾病造成的严重血小板减少，需要进行血小板输血。لكن，输血可能会引起血小板输血顽固可能发生，即输血后血液中的血小板不会升高。其主要原因是外来的血小板被患者自身免疫细胞破坏。在这种情况下，血小板不能通过异基因血小板输血来补充。如果血小板是由自体细胞制造的，输血就不会发生免疫反应。
日本京都大学iPS细胞研究所（CiRA）教授 Koji Eto，利用生物反应器从iPSC中制造出大量血小板，并开展再生障碍性贫血合并血小板输血顽固性的临床研究。临床试验目的是检测血小板制剂的安全性。单剂量递增研究，输血后随访一年。血小板治疗的过程：采集患者细胞，制备成iPS细胞。接着，再把iPS细胞制备成造血祖细胞，再分化成巨核细胞，并冷冻作为主细胞库，巨核细胞可以长时间储存。最后，由巨核细胞制备血小板。需要注意的是，血小板分离、浓缩和清洗后，需要通过照射根除残留的巨核细胞。
بحث سريري حول العلاج بالخلايا iPSC في اليابان
血小板批量制造方法概要
-07-
癌症免疫疗法：免疫细胞
في السنوات الأخيرة，癌症免疫治疗作为手术治疗、化疗（抗癌药物和激素给药）和放疗后的重要治疗选择，越来越到关注。
NKT细胞（自然杀伤T细胞）是一类兼具NK细胞和T细胞部分表型和功能的细胞亚群，通过识别CD1d上的MHC-I激活。被激活的NKT细胞，通过产生穿孔素等表现出直接的细胞毒活性。في نفس الوقت，也产生大量的细胞因子（如IFN-γ），诱导激活NK细胞和CD8+ T细胞，发挥抗肿瘤作用。
بحث سريري حول العلاج بالخلايا iPSC في اليابان
基于iPSC的癌症免疫细胞疗法
作为一种治疗头颈癌的新疗法，Haruhiko Koseki 和 Shin-Ichiro Fujii 研究组正在进行一项使用iPSC衍生的NKT细胞的临床试验（jRCT2033200116）。iPSC衍生的NKT细胞治疗的过程：首先，将异体iPSC诱导成NKT细胞，进行扩增培养，然后将约 3X10*8 个制备的NKT细胞，注入已接受现有患者的肿瘤部位血管内。根据输入后不良反应等情况及时调整剂量，共计回输3次。随访2年，确认安全性和有效性。
-08-
关节软骨损伤：软骨组织
骨关节炎是世界上最常见的关节疾病，在60岁以上人群中，10%的男性和18%的女性都受其影响。
日本京都大学iPS细胞研究所（CiRA）Noriyuki Tsumaki教授开展使用iPSC来源的软骨移植治疗关节软骨损伤的临床试验（jRCTa050190104）。研究团队已成功制备出了iPSC来源的高质量软骨。先前动物研究证实，iPSC来源的软骨不会产生肿瘤，并在移植区可以再生软骨。
临床研究目的是评价软骨损伤患者实施细胞移植后的安全性。主要终点事件是不良事件发生的频率和是否肿瘤发生。为了制备软骨，软骨细胞从来自HLA-homo iPS 细胞库里的iPSC诱导，软骨组织由软骨细胞产生。研究人员的目标是在未来用这种疗法来治疗膝关节骨性关节炎。
在临床研究中，研究者对患者实施单侧膝关节腔细胞移植，参与临床试验的患者4例，年龄在20-70岁，软骨部分损伤。关节镜下实施细胞移植修复软骨缺损。患者术后恢复6周。随访1年，观察软骨再生和修复情况。
-09-
尿素循环障碍：肝细胞
尿素循环障碍是指当尿素循环中某一种酶有先天性缺陷时，氨合成尿素发生障碍，游离的氨蓄积体内，形成高氨血症，临床上表现为严重的脑功能障碍。这个过程发生在肝脏细胞中。
传统的治疗手段需要进行肝脏移植，但出于安全考虑，日本规定只有在患儿体重达到6kg（一般出生3~5月以上）后才能进行移植。为了给后续的肝移植打下基础，需要在肝移植之前需要进行“桥梁治疗”。在日本，由于没有来自捐赠肝移植供体的肝细胞，最大挑战是确保质量一致的肝细胞作为肝细胞移植的稳定供应来源。
日本国立成育医疗研究中心 Akihiro Umezawa 研究小组专注于制备人胚胎干细胞来源的肝细胞（JMA-IIA00412），建立了人类胚胎干细胞来源的肝细胞库，长期低温保存，能够适应紧急使用。
临床研究中，在一名患有“尿氨酸血症1型”的尿素循环异常症的患儿出生的第六天，研究小组分两次在腹部注射了1.9X10*8个胚胎干细胞诱导分化来的肝细胞，用以提高肝脏的解毒功能。给药完成后，没有任何与移植过程相关的并发症或不良事件。患儿进行胚胎干细胞治疗后，大概6个月左右就接受了来自父亲的活体肝移植。في نفس الوقت，医院给患儿使用免疫抑制剂，避免了患儿产生排异反应。术后第二个月，患儿就出院了。患儿的移植很成功，病情稳定。这是日本国内首次使用胚胎干细胞治疗人体疾病，也是世界首例使用胚胎干细胞诱导肝细胞的移植手术。
-010-
肾脏疾病：肾元祖细胞
慢性肾功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是指各种肾脏疾病引起的缓慢进行性肾功能损害，最后导致尿毒症和肾功能完全丧失。由于捐献的肾源有限，绝大部分肾功能衰竭患者都只能依赖透析。在日本，大约有33万名透析患者，其中约有7000人已经接受透析治疗超过30年。
肾移植是一种恢复肾功能的治疗方法，是终末期肾衰竭患者透析的替代方法。肾脏移植主要有尸体肾移植和活体供肾移植。在日本，来自捐赠者的肾移植比较少。日本每年进行肾移植的数量被限制在约1700例左右。比起美国每年进行的2万多例，相差甚远。لذلك，治疗肾脏疾病的再生医学正在被热切地期待之中。
بحث سريري حول العلاج بالخلايا iPSC في اليابان
种间肾脏再生技术图示
研究小组将的iPSC诱导分化为肾元祖细胞 (nephron progenitor cells, الشخصيات غير القابلة للعب)，体外培育成肾芽后再移植给正在接受人工透析治疗的肾衰竭患者。先使用来自HLA-homo iPS 细胞库的肾元祖细胞，培育成肾芽，再分化诱导刺激形成肾小球和肾小管。由于肾脏被一层薄薄的胶囊覆盖，在动物实验中，研究团队将iPSC来源的NPCs注入肾实质和囊之间的空间，对缺血再灌注损伤诱导的急性肾衰竭小鼠模型有治疗作用。
小结和展望
我们概述了日本使用基于iPSC进行的临床试验。虽然iPSC仍然面临诸多挑战，但仍不能阻挡其在细胞治疗和其他应用方面的巨大潜力。大量的科学家仍然持续在这一领域进行努力耕耘，不断克服剩余的障碍。
في السنوات الأخيرة，国内基于iPSC治疗的企业也如雨后春笋般兴起，纷纷申请开展IND或IIT，开始各种尝试，探索中国的iPSC治疗。在不久的将来，基于iPSC的细胞治疗技术将成为一项真正的临床选择，在全球范围内为病人带来福音。
参考资料：
[1] Current status and future directions of clinical applications using iPS cells—focus on Japan[ج]. The FEBS Journal.
[2]Mandai M, Watanabe A, Kurimoto Y, Hirami Y,Morinaga C, Daimon T, Fujihara M, Akimaru H,Sakai N, Shibata Y et al. (2017) Autologous inducedstem-cell–derived retinal cells for maculardegeneration. N Engl J Med 376, 1038–1046.
[3]Japan Agency For Medical Research and Development(2019) Team performs the world’s fifirst transplant usingcorneal epithelial cell sheets from iPS cells, 20190829.
[4]Doi D, Magotani H, Kikuchi T, Ikeda M, HiramatsuS, Yoshida K, Amano N, Nomura M, Umekage M,Morizane A et al. (2020) Pre-clinical study of inducedpluripotent stem cell-derived dopaminergic progenitorcells for Parkinson’s disease. Nat Commun 11, 3369.
[5]Osada H, Ho WJ, Yamashita H, Yamazaki K, IkedaT, Minatoya K & Masumoto H (2020) Novel deviceprototyping for endoscopic cell sheet transplantationusing a three-dimensional printed simulator. RegenTher 15, 258–264
[6]Nakamura S, Sugimoto N & Eto K (2020) Ex vivogeneration of platelet products from human iPS cells.Inflflamm Regen 40, 30.
[7]Yamada D, Iyoda T, Vizcardo R, Shimizu K, Sato Y,Endo TA, Kitahara G, Okoshi M, Kobayashi M,Sakurai M et al. (2016) Effificient regeneration ofhuman Va24+ invariant natural killer T cells and theiranti-tumor activity in vivo. الخلايا الجذعية 34, 2852–2860.
[8]Japan Agency For Medical Research and Development(2020) Clinical trial with human ES cells for congenitalurea cycle disorder, 20200521
المعلومات الواردة في هذه الصفحة مخصصة للأغراض العلمية, التعليمية, والأغراض المعلوماتية العامة. النهج السريرية, التوفر, وقد يختلف الوضع التنظيمي حسب البلد, مؤسسة, والإشارة الطبية. للقرارات الطبية الفردية, يجب على القراء استشارة المتخصصين المؤهلين في الرعاية الصحية والمراكز الطبية المعتمدة.
تم إعداد هذه المقالة من قبل فريق تحرير NBScience ضمن نطاق البحث السريري, التكنولوجيا الحيوية, ومعلومات طبية عالمية.
